A. Judul Percobaan : Reaksi Hopkins-Cole
B. Tujuan Percobaan : Menguji kandungan Tryptophan pada bahan makanan
C. Kajian Teori :
Uji Hopkins-Cole digunakan untuk menunjukan inti indol asam aminotriptofan yang ditandai dengan terbentuknya cincin berwarna ungu pada sampel percobaan. Jadi reaksi Hopkins-Cole merupakan cara untuk menguji keberadaan Asam amino tryptofan pada bahan makanan. Pereaksi Hopkins Cole mengandung asam glioksilat (HgSO4). Prinsip uji Hopkins-Cole adalah kondensasi inti indol dengan aldehid dimana jika terdapat asam kuat yang menyebabkan terbentuknya cincin ungu pada bidang batas. Reaksi tersebut hanya akan berhasil jika ada oksidator kuat, seperti senyawa H2SO4 yang digunakan pada percobaan ini. Fungsi penambahan asam sulfat ini adalah sebagai oksidator agar terbentuk cincin ungu pada larutan sampel (Poedjiadi 2007).
Gambar 3.1 Reaksi Hopkins-Cole (Joshy dan Saraswat 2002)
Gambar 3.2 Gugus asam amino Triptofan (Yuwono Triwibowo 2005)
Larutan protein yang mengandung tryptofan direaksikan dengan asam glioksilat, kemudian ditambahkan asam sulfat pekat sehingga membentuk larutan pekat berwarna violet.
2. Alat dan Bahan
Alat:
- Tabung reaksi
- Pipet tetes
- Rak tabung
|
2 buah
4 buah
1 buah
|
Bahan:
- Larutan Millon
- Larutan Formaldehid
- Larutan H2SO4
- Putih Telor
|
10 mL
10 mL
10 mL
10 mL
|
3. Sifat Fisika dan Sifat Kimia bahan
1) Sifat Fisika
a. Formaldehid : cairan jernih (tidak berwarna), berbau menusuk, titik didih dan titik cair yaitu 96oC dan –15oC
b. H2SO4 :
- Asam sulfat murni berupa cairan bening seperti minyak
Kap(25 °C)= [H3SO4+][HSO4−] = 2,7 × 10−4.
2) Sifat Kimia
a. Formaldehid :
Berat jenis dan pH : 1.08 gr/cm3 dan 2.8
Volatilasi (21oC) : 100
Kepadatan uap (1 atm): 1.04
Tekanan Uap: 1.3 @ pada 20
b. H2SO4 :
- Asam sulfat bereaksi dengan kebanyakan logam via reaksi penggantian tunggal, menghasilkan gas hidrogen dan logam sulfat
4. Langkah Percobaan
Langkah pertama membuat larutan A yaitu protein encer dan larutan B yaitu protein pekat. Lalu masing-masing larutan di teteskan 1 mL formaldehid dan 1 tetes larutan millon melalui dinding tabung. Kemudian mengocok hingga terjadi 2 lapisan. Langkah terakhir adalah mengamati perubahan warna dan adanya endapan yang terjadi kemudian mencatat pada tabel pengamatan.
D. Hasil Pengamatan
Dari praktikum yang telah kami lakukan di dapat data hasil pengamatan sebagai berikut.
No
|
Bahan
|
Perlakuan
|
Pengamatan
| |
Sebelum
|
Sesudah
| |||
1
|
· Protein cair
· Formaldehid
· Milon
· H2SO4
|
Dicampur lalu dikocok
|
· Warna putih bening
· Bening
· Bening
· Bening
|
o Terbentuk 2 lapisan dan ada lingkaran warna ungu
|
2
|
· Protein pekat
· Formaldehid
· Milon
· H2SO4
|
Dicampur lalu dikocok
|
· Warnanya kuning bening
· Bening
· Bening
· Bening
|
o Terbentuk 2 lapisan. Lapisan pertama berwarna bening kekuningan dan lapisan kedua seperti endapan berwarna orange keunguan
|
E. Analisis Data
Pada tabel dapat dilihat bahwa pada percobaan 1 dengan menggunakan bahan uji berupa protein (putih telur) yang telah diencerkan, kemudian di campur dengan reagen serta H2SO4. Dari percobaan ini diperoleh perubahan pada keadaan sebelum perlakuan dan sesudah perlakuan. Semua bahan yang digunakan awalnya berwarna bening/ putih bening. Kemudian setelah diperlakukan dengan dicampur dan dikocok muncul 2 lapisan serta adanya cincin atau lingkaran ungu.
Sedangkan pada percobaan 2, bahan yang digunakan adalah sampel protein (putih telur) pekat, kemudian dicampur dengan reagen dan H2SO4. Dari percobaan 2 diperoleh hasil perubahan yang berbeda dari percobaan 1. Pada percobaan 2 perubahan yang terjadi adalah setelah perlakuan, terbentuk pula 2 lapisan. Namun tidak terbentuk cincin ungu. Lapisan pertama/ atas berwarna bening kekuningan, sedangkan lapisan kedua berbentuk seperti endapan berwarna putih dibagian bawah dan orange keunguan dibagian atas.
F. Diskusi
Tryptofan merupakan satu dari 20 asam amino penyusun protein yang bersifat esensial bagi manusia. Bentuk yang umum pada mamalia adalah, seperti asam amino lainnya, L-triptofan. Meskipun demikian D-triptofan ditemukan pula di alam. Gugus fungsional yang dimiliki triptofan, indol, tidak dimiliki asam-asam amino dasar lainnya. Tryptofan bisa ditemukan pada telur, terutama bagian putih telur.
Dari data dapat diketahui bahwa uji protein Hopkins Cole yang pertama menggunakan bahan protein cair, formaldehid, milon dan H2SO4 . Ketika semua bahan telah dicampur terbentuk 2 lapisan dan ada lingkaran berwarna ungu. Hal ini menunjukkan bahwa protein cair ini positif mengandung triptofan. Triptofan ini mengandung gugus indol yang akan berkondensasi dengan aldehid bila ada asam kuat yaitu H2SO4 sehingga terbentuk cincin berwarna ungu dibagian atas. Dalam hal ini sebagai H2SO4 oksidator kuat.
Dengan reaksi :
Kedua menggunakan bahan protein pekat, formaldehid, milon dan H2SO4 . Ketika semua bahan telah dicampur terbentuk 2 lapisan. Lapisan pertama berwarna bening kekuningan dan lapisan kedua seperti endapan berwarna orange keunguan. Hal ini menunjukkan bahwa protein pekat ini negatif mengandung triptofan. Cincin warna ungu akan terbentuk jika triptofan mengandung gugus indol yang akan berkondensasi dengan aldehid bila ada asam kuat yaitu H2SO4 . Protein pekat ini tidak mengandung triptofan sehingga tidak terbentuk cincin warna ungu pada bagian atas. Adapun endapan putih ini akibat penambahan milon. Apabila milon ditambahkan pada senyawa protein yang mengandung asam amino dengan rantai samping gugus fenolik akan menghasilkan endapan warna putih yang akan berubah menjadi merah jika dipanaskan. Sedangkan warna kuning berasal dari warna protein pekatnya yang mengakibatkan lapisan kedua seperti endapan berwarna putih kekuningan atau orange.
G. Kesimpulan
Uji triptofan pada protein dapat dilakukan dengan mencampurkan protein dengan reagen Hopkins cole, diantaranya berbahan formaldehid, milon, dan penambahan H2SO4 sebagai oksidator kuat. Uji triptofan dikatakan positif jika terbentuk cincin ungu pada campuran. Reaksi yang terjadi pada uji triptofan ini adalah
